核酸檢測的檢測方式 怎麼才能檢測出來
1、核酸序列依賴性擴增法，NASBA是由一對引物介導的、連續均一的、體外特異性核苷酸序列等溫擴增RNA的新技術。反應在 42 ℃進行 ,可在2h內將RNA模板擴增約109倍。NASBA原理是提取病毒RNA,加入AMV逆轉錄酶、RNA酶H、T7RNA聚合酶和引物進行擴增。整個反應分非迴圈相和迴圈相:在非迴圈相中,引物I與模板RNA退火後在AMV逆轉錄酶的作用下合成cDNA,形成RNA:DNA雜合體,隨即RNaseH降解RNA,引物Ⅱ與cDNA 退火, 在反轉錄酶作用下合成第2條DNA互補鏈。雙鏈DNA可在T7RNA聚合酶的作用下,經其啟動子序列起動而轉錄RNA，RNA又可在反轉錄酶的作用下反轉錄成DNA，進入迴圈相,對模板進行大量擴增。
2、轉錄介導的擴增技術，TMA技術原理與NASBA基本一致，略有不同之處是TMA利用的是MMLV逆轉錄酶及T7 RNA聚合酶兩種酶，MMLV逆轉錄酶既有逆轉錄酶的活性又具有RNA酶H活性。反應在41.5 ℃進行,可在1h內將RNA模板擴增約109倍。
3、連線酶酶促鏈式反應(LCR)，LCR是基於靶分子依賴的寡核苷酸探針相互連線的一種探針擴增技術，是繼PCR後新發展的一種較有前景的體外擴增技術。它的原理就是由2段寡核苷酸單鏈DNA探針與目標序列雜交,當該2段DNA探針與沒有發生突變的模板褪火後,如果2探針是緊鄰的,中間沒有核苷酸間隔,則可在連線酶作用下連線起來,連線以後的新鏈又可以作為模板,引導下一週期的連線產生新的子鏈。若連線區段發生核苷酸的鹼基突變,則連線反應不能發生,擴增反應終止。
